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18:052注：图甲呈现了VvSUC27基因原来的转录方向，KpnI、BamHI、SacI为限制酶识别位点，LB、RB分别为T-DNA的左边界、右边界回答下列问题：（1）获得VvSUC27基因。以葡萄植株的为材料提取总 RNA，加入—－处理以去除DNA污染，再经过_▲形成cDNA。根据VvSUC27基因序列（图甲）设计引物1和引物2扩增基因片段,应在引物1和引物2的5端分别添加限制酶—－的识别序列，以确保目的基因的反向插入。高二生物试卷第9页(共10页）（2）构建反义VvSUC27基因表达载体。对目的基因和质粒同时进行BamHI和SacI双酶切处理，然后利用—连接，得到重组表达载体。为验证VvSUC27基因是反向插入载体中，用不同的限制酶组合剪切重组质粒后，进行_－分离酶切后的DNA片段，结果如下图所示。根据泳道_－可判断VvSUC27基因是反向插入的。图中的→（选填上/下）端，对应电泳槽的正极。24kbbp泳道1:DNA Marker 121=泳道2：重组表达载体 SacI+KpnI酶切后泳道3：重组表达载体 SacI+BamHI酶切后1000（3）制备转反义VvSUC27基因烟草。先将经_▲溶液处理的农杆菌与重组表达载体混合，得到含有重组质粒的农杆菌液，再让其侵染经切割的叶片5min后，用无菌纸吸干多余的菌液后，将共培养的叶片接种到含有羧苄青霉素的培养基上培养一天，再转移到含有卡那霉素的培养基上培养生芽，这里羧苄青霉素和卡那霉素的作用分别是—－。待小芽长至3~5cm，转入只含_－（填植物激素）培养基中继续培养生根，形成完整植株。（4）鉴定转基因烟草的表型。对筛选得到的转基因烟草可进一步通过PCR 和_－技术等，鉴定是否成功转入反义VvSUC27基因。继续研究发现转基因烟草根部蔗糖转运蛋白基因（NtSUTI）的mRNA含量与野生型烟草相近，但转基因烟草根部的蔗糖含量明显低于野生型烟草，可能的原因是_■，使翻译受阻，无法在根部形成蔗糖转运蛋白，从而无法正常吸收蔗糖。高二生物试卷第10页(共10页）w存网盘页面管理转Word笔记标注
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