2024届高三全国100所名校AB测试示范卷·生物[24·G3AB(新教材老高考)·生物-SJB-必考-QG]二试题

2024届高三全国100所名校AB测试示范卷·生物[24·G3AB(新教材老高考)·生物-SJB-必考-QG]二试题正在持续更新，目前2025百师联盟答案网为大家整理了相关试题及答案，供大家查缺补漏，高效提升成绩。

2022一2023学年度高三一轮复习周测卷（二十五）生物·基因工程，植物细胞工程(考试时间40分钟，总分90分)非选择题：本题共6小题，共90分。带*题目为能力提升题，分值不计入总分。1.(15分)CBF1基因过量表达能提高拟南芥植株的抗寒性。苜蓿是饲草料产业发展的主要草种，低温等逆境胁迫会导致苜蓿减产。科研人员从拟南芥植株中克隆得到冷诱导转录因子基因(ACBF1),通过转基因技术培育抗寒紫花苜蓿，以使苜蓿安全越冬，提高产量。回答下列问题：(1)在扩增AtCBF1基因的过程中，先根据设计引物，再进行PCR扩增。扩增时，反应体系的初始温度设置在90~95℃的目的是。PCR过程中需要使用酶。(2)回收PCR产物并酶切后用将AICBF1基因连接到Ti质粒上，以得到T-CBF1重组质粒。构建T-CBF1重组质粒时，同时使用Bam HI和SacI进行双酶切的目的是(3)将目的基因导入受体细胞，培育后筛选转化阳性的植株。若采用分子杂交技术检测转基因紫花苜蓿植株目的基因的转录水平，则需要将片段制成探针。(4)为进一步研究转基因紫花苜蓿的抗寒机制，请写出接下来还需要进行的操作！【答案】(I)AICBF1基因的核苷酸序列使DNA受热变性后解链为单链Taq(或热稳定DNA聚合或耐高温的DNA聚合)(2)DNA连接酶产生不同的黏性末端，使目的基因和质粒定向连接，防止自身环化(3)放射性标记的AICBF1基因(4)通过植物组织培养获得大量转基因植株，并观察低温胁迫下植株生长状况（合理即可）【解析】(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物，所以在扩增AICBF1基因的过程中，先根据AtCBF1基因的核苷酸序列设计引物，再进行PCR扩增。扩增的过程：DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在热稳定DNA聚合酶的作用下进行延伸，如此重复循环。扩增时，反应体系的初始温度设置在90~95℃的目的是使DNA受热变性后解链为单链，PCR过程中需要使用热稳定DNA聚合酶。(2)DNA连接酶是基因的“针线”，回收PCR产物并酶切后用DNA连接酶将AICBF1基因连接到Ti质粒上，以得到T-CBF1重组质粒。构建T-CBF1重组质粒时，使用一种酶切易导致目的基因自身环化，所以同时使用BamHI和SacI进行双酶切，产生不同的黏性末端，使目的基因和质粒定向连接。(3)分子杂交技术可检测目的基因是否转录出了mRNA,方法是从转基因生物中提取mRNA,用标记的目的基因作为探针，与mRNA杂交，如果显示出杂交带，则表明目的基因转录出了mRNA。所以，若采用分子杂交技术检测转基因紫花首蓿植株目的基因的转录水平，则需要将放射性标记的ACBF1基因片段制成探针。(4)为进一步研究转基因紫花首蓿的抗寒机制，可以通过植物组织培养获得大量转基因植株材料，并在低温胁迫下观察植株生长状况，检测紫花首蓿的产量。2.(15分)小干扰RNA(siRNA)能诱导特定基因转录出的mRNA被降解，导致基因沉默。目前制备siRNA的方法中，最常见的是以质粒为载体，依赖一个启动子控制一段反向重复序列R转录，在细胞内生成短发夹RNA(shRNA),随后shRNA被特异性核酸酶剪切成siRNA(如图I),该载体被称为shRNA表达载体。研究人员对实验室常用的普通载体进行改造，构建了含有双启动子(U6)的shRNA表达载体(pdPRO),如图2所示，其中相关限制酶的识别序列及切割位点如表。回答下列问题：·87·